Jenis Mikroskop Fluoresensi

Ketika mikroskop ditemukan sekitar 1600 C, filsuf alam mengalihkan pandangan mereka ke dunia di dalam dunia. Ketika Antony van Leeuwenhoek membuat lensa kecil, sangat melengkung dan dudukan mekanik untuk menyesuaikan tampilan, ia membuka jendela ke dunia mikroskopis bakteri, sel darah, protozoa dan struktur seluler tanaman. Namun sepanjang sejarah mikroskop, selalu ada satu pertanyaan: Apa hal-hal aneh yang terlihat melalui lensa? Mikroskopi fluoresensi mengacu pada seperangkat teknik yang meminimalkan ketidakpastian itu - karena dalam mikroskopi fluoresensi ketika cahaya disinari sampel, ia memancarkan cahayanya sendiri segera.

Epifluoresensi
Sejauh ini mikroskop fluoresensi yang paling umum adalah konfigurasi epifluoresensi. Dalam mikroskop epifluoresensi, sumber cahaya - biasanya lampu merkuri atau xenon - bersinar melalui filter yang memilih wilayah sempit panjang gelombang. Cahaya yang disaring bersinar ke sampel melalui lensa objektif mikroskop. Cahaya yang masuk diserap oleh fluorofor - label molekuler yang memancarkan cahaya dengan panjang gelombang yang panjang ketika mereka menyerap cahaya dengan panjang gelombang yang lebih pendek. Cahaya dari fluorofor, bersama dengan cahaya yang berserakan dari sumber penerangan, kembali ke lensa objektif dan ke detektor atau mata. Di sepanjang jalan, filter lain menghalangi cahaya iluminasi, jadi yang tersisa hanyalah cahaya fluoresen dari sampel.

Confocal
Sebuah mikroskop epifluoresensi mengumpulkan cahaya dari mana saja dalam bidang pandang mikroskop. . Beberapa cahaya eksitasi diserap sebelum bidang fokus mikroskop, beberapa di bidang fokus dan beberapa di luar bidang fokus. Karena mikroskop mengumpulkan semua cahaya itu, gambar akan berisi gambar cahaya tajam pada fokus, tetapi juga akan memiliki cahaya tidak fokus dari daerah lain. Mikroskop confocal memperbaikinya dengan memfokuskan titik laser pada bidang yang sama dengan mikroskop. Kemudian, sebuah lubang jarum berada di depan detektor, di mana ia memblokir semua cahaya yang tidak berasal dari fokus mikroskop. Dengan memindai sampel, gambar tiga dimensi yang bersih dari objek dapat diperoleh.

Multiphoton
Dalam mikroskop confocal, pelurusan sangat sensitif. Jika titik laser, tujuan mikroskop, optik pengumpul, dan lubang jarum tidak aktif meskipun jumlah terkecil yang diderita kinerja mikroskop. Sebuah mikroskop multiphoton mengatasi masalah ini dengan menggunakan panjang gelombang laser yang hanya setengah dari energik yang diperlukan untuk menggairahkan fluorofor dalam sampel. Satu-satunya cara fluorofor akan bersemangat dan memancarkan fluoresensi adalah jika sinar laser cukup terang sehingga dua partikel cahaya - foton - menyerang fluorophore dalam waktu yang sangat singkat. Itu terjadi hanya ketika laser difokuskan ke tempat yang sangat kecil. Jadi satu-satunya tempat dalam sampel yang akan memancarkan cahaya adalah tempat laser difokuskan, yang menjaga gambar tetap bagus dan bersih karena tidak ada cahaya latar tambahan yang harus disingkirkan - yang berarti tidak ada lubang jarum untuk disejajarkan.

Total Internal Reflection Fluorescence (TIRF) - Cara lain untuk mendapatkan gambar yang sangat bersih adalah untuk memastikan cahaya eksitasi tidak terlalu jauh ke dalam sampel. Jika gumpalan neuron, misalnya, ditempatkan dalam setetes larutan pada slide kaca, maka beberapa neuron akan melekat pada permukaan kaca. Dalam mikroskop fluoresensi refleksi internal total (TIRF) cahaya diarahkan ke slide kaca sehingga tidak benar-benar membuatnya menjadi solusi memegang sel. Tetapi beberapa cahaya nyaris tidak bocor ke dalam larutan - hanya sangat dekat dengan permukaan kaca. Ini berarti satu-satunya tempat yang akan memancarkan cahaya akan berada di wilayah yang sangat tipis tepat di atas permukaan kaca. Untuk sesuatu seperti neuron, di mana begitu banyak hal menarik terjadi pada permukaan sel, teknik ini bisa sangat efektif.

Resolusi-Super
Semua mikroskop - termasuk mikroskop fluoresensi - dibatasi oleh fisika yang mengatur penyebaran cahaya. Salah satu aturan dasar adalah bahwa titik cahaya yang terfokus hanya bisa menjadi sangat kecil - dan tidak lebih kecil. Untuk cahaya tampak, ukuran itu sekitar 200 nanometer, atau 200 miliar meter. Tetapi molekul tunggal hanya berukuran beberapa nanometer, jadi ada banyak fitur menarik yang berada di bawah batas ukuran itu, yang disebut batas difraksi. Para ilmuwan sedang mengembangkan teknik "resolusi super" untuk menyelinap di sekitar batas itu. Mikroskopi penerangan terstruktur (SIM) dan mikroskopi penipisan emisi terstimulasi (STED), misalnya, keduanya merupakan metode mikroskop fluoresensi yang membatasi ukuran tempat pemancar cahaya dengan mengecilkan ukuran titik cahaya eksitasi.

URL:https://komputer.whycomputer.com/Perangkat-keras/101307040.html